Nuôi cấy mô – nhân giống Invitro
Phương pháp này không áp dụng được tại các nhà vườn. Đây là phương pháp nhân giống Lan với số lượng rất lớn trong thời gian ngắn.
Bước 1: Chọn mẫu tốt và tiến hành vô trùng mẫu
Tiến hành lựa cây có tính trạng tốt nhất. Cắt phát hoa( đoạn lúc hoa chưa nở) hoặc dùng đỉnh sinh trưởng của cây Lan Dendro nắng.
Nếu dùng đỉnh sinh trưởng để nhân, chọn phần chồi non khoảng 3-5 cm. Bóc vảy hành cho đến khi thấy phần đỉnh. Sau đó, cắt ra và tiến hành khử trùng.
Vô trùng mẫu: bằng cách ngâm trong cồn 70° trong 30 giây. Rồi rửa sạch bằng nước cất vô trùng ngâm trong dung dịch Javel 50% 4-5 phút. Có thể ngâm tiếp trong muối thủy ngân HgCl2 0.1% 1 phút. Mô sau đó được rửa lại với nước cất vô trùng 4 – 5 lần. Quá trình vô trùng được tiến hành trong tủ cấy.
Bước 2: Nhân giống invitro
Mẫu vô trùng ở bước 1 sau đó được đưa vào bình nghiệm nuôi cấy. Trong bình này chứa môi trường nuôi cấy lan. Có thể là Knudson C orchid medium, có thể là môi trường Murashige and Skoog medium gọi tắt là MS. Môi trường nuôi cấy là yếu tố quyết định đến chất lượng của cây. Ở mỗi nơi sẽ có bí quyết môi trường riêng.
Yêu cầu nhiệt độ trong môi trường nuôi cấy
Nhiệt độ nuôi cấy từ 22 độ C đến 25 độ C. Ở những nơi khí hậu mát mẻ nhưng Đà Lạt, Đức Trọng thì không cần phải lắp máy điều hòa nhiệt độ. Nhưng trồng ở nơi nóng thì phải lắp để bảo đảm điều kiện tối ưu hóa cho cây Lan.
Yêu cầu ánh sáng trong môi trường nuôi cấy
Ánh sáng cũng là một yếu tố không kém quan trọng. Có thể mở đèn 12 giờ sáng/ ngày hoặc thiết kế phòng sao cho có nhiều ánh sáng chiếu vào phòng.
Sau khoảng 2-3 tuần thì ta thấy xuất hiện các thể li ti gọi là protocom. Chúng là những mầm non sẽ hình thành nên một cây mới. Cắt và chia nhỏ protocom ra các bình môi trường khác. Từ một mẫu cây hình thành nên rất nhiều thể protocom.
Bước 3: Giai đoạn nhân nhanh
Lấy mẫu từ giai đoạn 2 đem qua môi trường ở giai đoạn 3. Những thể li ti hoặc những cây con nhỏ xíu được cấy chuyền vào các bình môi trường khác. Những bình này có thể thêm hormone nhằm kích thích chúng phát triển phần thân. Hormone ở giai đoạn này là Cytokinins( 6-BAP, TDZ, Kinetin, …) thông thường người ta xài 6-BAP để kích thích chồi vì giá thành rẻ hơn so với các chất trong nhóm cytokinins.
Cũng lưu ý thêm là có thể sử dụng thêm Auxin ở giai đoạn này để chúng kích thích một ít rễ nhằm tạo ra cây con đầy đủ các bộ phận trước khi đem ra vườn ươm.